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Oct 24, 2023

Imunogenicidade de um secretado, C

Relatórios Científicos volume 13,

Scientific Reports volume 13, Número do artigo: 296 (2023) Citar este artigo

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Ambas as vacinas atuais de vírus vivo, atenuado e morto para o vírus da diarreia viral bovina (BVDV) têm suas limitações. Aqui, relatamos o desenvolvimento de uma vacina de subunidade BVDV por (i) a expressão de uma forma secretada de uma glicoproteína E2 recombinante usando células BHK21 e (ii) determinação das respostas imunes em camundongos. A glicoproteína E2 foi modificada por deleção do domínio de âncora transmembranar C-terminal e fusão a um marcador de epítopo V5. Isso permitiu a detecção usando anticorpos monoclonais anti-V5 juntamente com a purificação simples da forma expressa e secretada de E2 a partir do meio celular. Além disso, fundimos geneticamente a proteína fluorescente verde (GFP) ligada a E2 por meio de uma sequência de salto de ribossoma do vírus Thesea asigna 2A (T2A), criando assim uma poliproteína de autoprocessamento [GFP-T2A-BVDV-E2trunk-V5], produzindo discreta [GFP- Produtos de tradução T2A] e [E2trunk-V5]: a fluorescência GFP atua, portanto, como um marcador substituto da expressão de E2, camundongos BALB/c foram inoculados com [E2trunk-V5] purificado de meio celular e foram observadas respostas imunes humoral e celular . Nosso sistema de expressão de antígeno fornece, portanto, (i) um protocolo simples de purificação de antígeno junto com (ii) uma estratégia viável para produção adicional de vacinas em larga escala.

O vírus da diarreia viral bovina (BVDV) é um importante agente infeccioso em bovinos, suínos e outros ruminantes; causa diarreia viral bovina e doença das mucosas, levando a vários desfechos clínicos que variam de doença leve a doença aguda e grave com risco de vida1. Os sinais clínicos da infecção por BVDV incluem febre, depressão, anorexia, erosões da mucosa, secreção ocular e nasal purulenta, tosse, atonia ruminal, diarreia, aborto e diminuição da produção de leite2. A infecção por BVDV também causa imunossupressão, aumentando assim a suscetibilidade à pneumonia bacteriana ou viral3. Em animais com imunossupressão induzida pelo BVDV, a exposição a outros patógenos pode aumentar muito sua morbidade e mortalidade, com um impacto econômico negativo correspondente nas indústrias de carne bovina e leiteira4,5.

O genoma do BVDV é um RNA de detecção positiva de fita simples de aproximadamente 12,3 kb. O BVDV pertence ao gênero Pestivirus da família Flaviviridae, juntamente com o vírus da doença de fronteira (que afeta ovinos) e o vírus da peste suína clássica6. O BVDV compreende dois genótipos principais: BVDV-1 (Pestivirus A, dividido em 22 subtipos de BVDV-1a a BVDV-1v) e BVDV-2 (Pestivirus B, dividido em quatro subtipos de BVDV-2a a BVDV-2d). Outro pestivírus atípico conhecido como vírus HoBi-like foi identificado provisoriamente como BVDV-3, que possui quatro subtipos7. Cada BVDV possui dois biótipos, citopáticos e não citopáticos, de acordo com os efeitos do vírus cultivado nas células cultivadas. A cepa não citopática não danifica as células infectadas8. Pode infectar o feto em desenvolvimento se as vacas forem expostas ao vírus durante o início da gestação. Além disso, o BVDV é perpetuado no rebanho através da produção de bezerros persistentemente infectados (PI)9, uma vez que eles se tornam imunotolerantes ao vírus e eliminam grandes quantidades de vírus ao longo de suas vidas. Portanto, os animais PI são considerados uma importante fonte de disseminação do BVDV10. As medidas mais eficazes nos programas de prevenção do BVDV incluem medidas de biossegurança, erradicação do gado PI e vacinação5,11.

As vacinas atuais contra o BVDV são vacinas de vírus vivos modificados multivalentes e vacinas de vírus inativados11,12,13,14. Vacinas vivas, atenuadas e inativadas comercialmente disponíveis têm segurança e eficácia limitadas: a vacina de vírus vivo modificado pode reverter a virulência e levar a bezerros IP, enquanto a vacina de vírus inativado tem proteção de curta duração e não pode estimular uma resposta imune celular15. Portanto, uma vacina de BVDV de subunidade segura e eficaz é necessária para proteção a longo prazo de bovinos contra BVDV.